Получение половых продуктов прижизненным способом
В современной рыбоводной практике применяется метод прижизненного получения половых продуктов. Для сохранения жизни используемых производителей и удобства работы используют различные анестезирующие вещества как синтетического, так и натурального происхождения (Рывлина, 1985; Микодина и др., 2004; Никоноров и др., 2005).
В эксперименте с гвоздичным маслом было использовано 15 производителей сибирского хариуса, выловленных в р. Енисее, средней массой: самок 260±0,3, самцов 281±0,2 г. Рыб помещали в воду с гвоздичным маслом различной концентрации, температура воды составляла 5,7 °С, содержание кислорода 11,2 мг/л.
В ходе эксперимента выделялись две условные фазы: а ? легкое снижение чувствительности и б ? (полная потеря равновесия, засыпание).
При использовании концентрации гвоздичного масла 0,01 мл/л за период 2 - 5 мин. регистрировалось легкое снижение чувствительности (фаза а): медленные наклоны тела в стороны, спинной плавник заваливался набок, оборонительные рефлексы сохранялись. Дальнейшее нахождение рыбы в воде с указанной концентрацией масла (независимо от пола и массы) не приводило к следующей фазе анестезии ? б.
Для достижения рыбами полного снижения чувствительности (фазы б) была увеличена концентрация гвоздичного масла до 0,02 мл/л. Самцы достигали фазы а на 2-ой минуте (2,5 мин), фазы б ? на 4 мин 30 с. Интервал между фазами а и б составлял в среднем 2 мин 20 с. Данный период характеризовался потерей рыбой равновесия, заглатыванием кислорода, после «вздрагивания» жаберных крышек наступала следующая стадия (рисунок 22).
Рисунок 22 Производители хариуса во время проведения экспериментов с гвоздичным маслом, фаза (б) потеря равновесия, засыпание
Аналогично самцам, фаза легкого снижения чувствительности у самок хариуса наступала в среднем на 2-ой минуте и длилась около 2 мин 20 с. Фаза полного снижения чувствительности (б) и переворачивания рыбы вверх брюшком колебалась в интервале 4 мин – 4 мин 40 с.
После возвращения рыбы в бассейн с чистой аэрируемой водой происходило восстановление физиологического состояния до нормального за относительно равный промежуток времени (8-10 мин).
При отборе половых продуктов у производителей нахождение рыбы в воде с гвоздичным маслом не превышало 15 мин.
Технология сбора половых продуктов производителей хариуса. Основываясь на проведенных исследованиях (Микодина и др., 2010) на различных видах рыб, использован анестетик гвоздичное масло. Анестетик концентрацией 0,02 мг/л растворяли в небольшом количестве воды, далее вводили в емкость с большим количеством воды и все тщательно перемешивали. Можно использовать ванны объемом 40-50 л. В полученный раствор помещали созревших производителей хариуса, отдельно самок и самцов. За время отбора половых продуктов производители могут безопасно находиться в ванне с гвоздичным маслом около 15 мин. Дополнительно в ванну с раствором гвоздичного масла можно установить аэратор. Обычно сбор половых продуктов осуществлялся в несколько подходов (партиями), поэтому количество производителей в среднем не превышало 20 особей за один подход.
Все рыбоводные работы следует проводить под навесом или в затемненных условиях, избегая прямого освещения.
После того как на производителей подействовала анестезия, их доставали из воды и по мере необходимости взвешивали. Обязательным условием является обсушивание брюшка и плавников (анальный, грудные, хвостовой) тканью. Для удобного и менее травматичного сбора половых продуктов тело производителей аккуратно обматывали тканью.
Отдельно отцеживали икру от самок и сперму от самцов. В небольшую емкость (эмалированный тазик), проводили сбор икры самок. Аккуратно, ровной струей, по краю анального плавника икра самостоятельно стекала по стенкам в таз. Известно, что у форели в зависимости от загрязнения икры содержимым лопнувших икринок может снижаться процент оплодотворения (Шиндавина и др. 2013).
Во время сбора икры в емкость не должны попадать вода, кровь и т.д. Объем отцеженной икры не должен превышать 1/3 объема емкости тары.
Для сбора спермы от самцов использовали ложку. Примерное соотношение полов при использовании сцеженной спермы составляет 1:2 (самки:самцы).
После сбора сперму аккуратно добавляли к икре и пером в течение 0,5 мин перемешивали. Тазик с икрой накрывали чистым полотенцем и оставляли в покое на 2,5-3,0 мин. В это время икру 1-2 раза следует помешивать пером. Для активации сперматозоидов в емкость к икре со спермой добавляли воду в объеме 0,5 л при одновременном перемешивании пером. Затем оставляли в покое на 2-3 мин, при этом 1-2 раза аккуратно перемешивали.
Далее икру обесклеивали: добавляли чистую воду по краю чаши, практически до краев, при этом аккуратно и небыстро икру помешивали пером (движения снизу вверх), после чего воду сразу сливали. Подобные действия повторяли до тех пор, пока вода в тазике с икрой не становилась чистой и прозрачной, и икра перестовала прилипать к стенкам тазика. Как только икра переставала прилипать к стенкам тазика (при обесклеивании в течение 20 мин) ее оставляли в тазах для набухания не менее чем на 2 ч, накрыв таз чистой сухой тканью, и каждые 30 мин проводили смену воды на свежую.
Транспортировка. После набухания икры не менее чем 2 - 4 ч её можно перевозить. Однако не все стадии развития икры пригодны для перевозки. Перевозку икру не следует осуществлять при следующих стадиях развития: в момент гаструляции, на начале формирования зародыша, замыкания бластопора (Соин, 1963).
Для транспортировки икры существуют специальные контейнеры, термостатические ящики, полиэтиленовые мешки. Перед закладкой для транспортировки в ящиках икру необходимо разложить на рамки на увлажненную марлю, обработанную в растворе метиленового синего. После укладки на рамки икру обязательно проливают свежей водой. Для соблюдения температурного режима внутрь ящика после установки всех рамок с икрой дополнительно закладывают лёд на пустую рамку, после чего ящик плотно закрывают крышкой. В таком состоянии икра может храниться несколько суток при условии ее пролива (купания) свежей чистой водой температурой, соответствующей температуре внутри ящика, не менее чем 2-3 раза в сутки.
После завершения транспортировки икры и перед закладкой ее на инкубацию температурный режим также необходимо постепенно выравнивать, поднимая температуру на 1 ?С каждые 1-2 ч в зависимости от разницы. Закладка икры на инкубацию возможна только после выравнивания температурного режима. В иных случаях, если разница температур больше, чем на 2 ?С, гибель икры может достигать 100 % (даже при условии успешной транспортировки).
Альтернативой перевозки икры в изотермических контейнерах на небольшие расстояния может быть ее транспортировка в полиэтиленовых пакетах. В пакеты заливают воду, на 1/4 объема закладывают икру и закачивают кислород. Затем пакеты плотно завязывают, пакуют в плотные мешки во избежание порыва. При перевозке мешки с икрой не должны подвергаться перегреву или переохлаждению. После завершения транспортировки температурный режим также необходимо выравнивать.