2. Исследование кариотипов сиговых рыб .
Теперь обратимся непосредственно к результатам, полученным нами в ходе многолетних исследований. Был проведен анализ пяти форм сигов p. Coregonus — пеляди, чира, муксуна, пыжьяна и чудского сига. Найболее подробно была изучена пелядь, с которой в период кариологичеСких исследований проводилась селекционная работа.
В работе были использованы две известные методики приготовления хромосомных препаратов рыб. Первая из этих методик, более ранняя, применяется для кариологических исследований на эмбриональных стадиях. Многие авторы использовали ее в своей работе и получали хорошие результаты (Simon, 1960, 1963; Booke, 1968,1975). Однако по мнению многих авторов, она недостаточно хорошо отражает морфологию хромосом и, следовательно, создает трудности в точном определении числа хромосомных плеч. Нам удалось выяснить, что успех применения данной методики зависит от двух причин.
Первая и главная причина заключается в оптимальных сроках фиксации икры, которые подбираются эмпирическим путем. Для СИГовых рыб это обычно 3-5-е сутки в зависимости от температуры воды в условиях искусственной инкубации (при 2-6°). Именно в это время икра проходит стадию средней и поздней бластулы, которая дает возможность произвести хромосомный анализ на стадии метафазы. Отдельные метафазы бывают очень хорошего качества – без хромосомных наложений ис четко выраженными центромерными районами. Вторая причина успеха заключается в применении молочной кислоты, которая размягчает бластодиск и обесцвечивает цитоплазму за две-три минуты, не успев при этом обесцветить хромосомы.
Кроме этой методики в работе была использована другая, так называемая колхициновая методика. Существует много вариантов и разновидностей этой методики, на которых мы не будем останавливаться (Дорофеева, Викторовский, 1974). Суть использованного нами варианта заключается в применении колхициновых инъекций для рыб в возрасте от 0+ и старше. После инъекций рыб отсаживали в бассейн с чистой проточной водой и выдерживали в течение нескольких часов. Затем рыб забивали и брали внутренние органы для дальнейшей обработки цитратом натрия, а затем переводили в фиксатор. В качестве фиксатора при работе с обеими методиками использовали чистый спирт и ледяную уксусную кислоту (3:1). Далее приготавливали препараты — временные или постоянные, для чего заключали предметные стекла с нанесенным на них материалом в бальзам.
| Пелядь (Coregonus peled Gmelin) |
| Чир (Coregonus nasus Pallas) |
| Муксун (Coregonus muksun Pallas) |
| Пыжьян (Coregonus lavаrеtus pidschian Gmelin) |
| Чудской сиг (Coregonus lavаrеtus maraenoides Poljakov) |