2. Рыбоводно-биологическая характеристика инбредных потомств.
Характеристика инбредных потомств в раннем онтогенезе. Сравнительную оценку качества инбредных потомств начинали с эмбрионального периода, при этом учитывали те показатели самок (диаметр икринок и его изменчивость), от которых зависели выживаемость и качество эмбрионов (табл. 5.1).
Таблица 5.1 Характеристика потомства инбредных самок в эмбриогенезе
Исследование диаметра овулировавших икринок у самок разных поколений инбридинга показало, что самки 1, в большинстве случаев сохранили межлинейные различия по размеру икринок, наличие которых было выявлено у самок из семей сибсов и линий первого инбредного поколения (Андрияшева, Черняева, 1985).
Разнообразие инбредных самок по среднему диаметру икринок (V,%) во всех поколениях было несколько ниже (р<0,05), чем в семьях сибсов. Вместе с тем у инбредных самок оказалась повышенной величина индивидуальной изменчивости икринок по диаметру (V %), уровень которой является важным показателем качества икры у самок различных видов рыб. Он существенно изменился уже в первом поколении — был выше во всех инбредных потомствах, чем в исходных сибсовых семьях (Андрияшева, Черняева, 1985), и возрастал с увеличением степени инбридинга (р<0,01-0,001), что можно было рассматривать как один из первых признаков ухудшения качества икры при инбридинге (Черняева, 1987).
Выживаемость потомства в эмбриогенезе у самок всех поколений инбридинга оказалась пониженной при сравнении с племенными семьями; различия были достоверны (р<0,01) и составляли от 13 до 31% (см. табл. 5.1). Количество эмбрионов с аномалиями развития существенно варьировало в разные годы у самок различного происхождения, но при этом в инбредных потомствах было всегда выше (на 20-80%), чем у племенных рыб.
Выращивание инбредных сеголеток четырех поколений и контрольных племенных рыб проводили в однотипных прудах площадью по 0,5 га при плотности посадки 3 тыс. шт/га. Ограниченное количество прудов не позволило провести выращивание в нескольких повторностях и дать точную сравнительную оценку скорости роста и выживаемости этих рыб. Однако результаты, полученные при выращивании инбредных сеголеток и контрольных племенных рыб, дают основание считать, что ни выживаемость, ни скорость роста на первом году жизни у пеляди при близкородственном разведении существенно не ухудшились; найболее вероятно, что эти параметры в основном зависели от условий выращивания (табл. 5.2).
Таблица 5.2 Результаты выращивания инбредных и племенных сеголеток
Вместе с тем, несмотря на сходные показатели Выживаемости и роста инбредной молоди по сравнению с сеголетками аутбредного происхождения, при дополнительных исследованиях удалось обнаружить снижение качества инбредных потомств, не зависящее от условий выращивания. Так, при изучении парных меристических признаков, которые позволяют оценивать показатели стабильности развития особей в популяции по значениям флюктуирующей асимметрии (ФА), было обнаружено существенное различие между сравниваемыми потомствами – 10 линиями | , и 6 линиями 1, которые выращивались в сходных с аутбредным потомством условиях (табл. 5.3).
Таблица 5.3 Показатели стабильности развития (ФА) инбредных годовиков 1 и 14
Как показали результаты этого исследования, величина ФА двух парных меристических признаков у сеголеток из инбредных линий 3-го и 4-го поколений инбридинга оказалась значительно выше (по ФА жаберных Тычинок в 1,6-2,4 раза, а по ФА жаберных лучей — в 1,4-1,6 раза), чем в потомствах, использованных в качестве контроля (р<0,01).
Параллельное изучение качества этих же потомств в эмбриогенезе позволило выявить корреляции между выживаемостью и количеством аномальных эмбрионов, с одной стороны, и величиной ФА – с другой (табл. 5.4). Сходные, хотя и невысокие значения отрицательных корреляций между выживаемостью эмбрионов и показателями ФА по двум признакам, обнаруженные у сеголеток в двух поколениях инбридинга, могут служить объективной оценкой снижения качества инбредных потомств в раннем онтогенезе.
Таблица 5.4 Корреляции (r) показателей стабильности развития и выживаемости эмбрионов в инбредных потомствах I, и I
Характеристика половозрелых рыб из инбредных линий. Инбредные самки первого поколения по размерно-весовым признакам и показателям плодовитости существенно не отличались ни от самок из Сибсовых семей, ни от самок исходного ендырского стада (Андрияшева, Черняева, 1985).
Выращивание рыб второго и третьего инбредных поколений проводили в условиях разной обеспеченности кормом, аналогично схеме, которая использовалась при исследовании 9 семей полных сибсов (см. гл. 3). Для этого двухгодовики каждой из линий I, и, были разделены на две группы и выращивались до нереста в разных прудах: одна группа – при достаточной обеспеченности кормом («+ среда»), вторая — при недостатке корма (» — среда»).
Как видно из табл. 5.5, где представлены среднегрупповые значения исследованных признаков (X) и их изменчивости (V,%) трехлетние самки разного происхождения — как племенные (FS), так и инбредные (1) — 1) — при выращивании в прудах с контрастными условиями нагула существенно различались по размерно-весовым показателям и репродуктивным признакам (р<0,05-0,01). При этом наибольшие различия (до 1,5-2 раз) наблюдались по весу и рабочей плодовитости у рыб из всех сравниваемых групп.
Таблица 5.5 Размерно-весовые и репродуктивные признаки племенных и инбредных самок при разной обеспеченности рыб кормом
- При сравнении инбредных самок 1, с племенными сибсами по весу и другим размерно-весовым показателям существенных различий между ними обнаружено не было. Вместе с тем трехлетние самки 2-го поколения инбридинга, имевшие сходные с племенными сибсами значения размерно-весовых признаков, отличались от них пониженной плодовитостью как на «+» среде, так и на «-» среде (р<0,01).
Самки третьего поколения инбридинга имели на каждой из сред меньший вес, чем одновозрастные рыбы из 2-го поколения (Черняева, 1987; Черняева, Мельникова, 1991), что могло быть связано не только с условиями выращивания в разные годы, но и, очевидно, с проявлением депрессии. Плодовитость рыб 1, выращенных при недостатке корма, оказалась существенно ниже (на 12,7%), чем у одновозрастных самок из 1, (Черняева, 1987), в то же время при выращивании на «оптимальной» среде таких различий по плодовитости не наблюдалось.
При исследовании самок разных поколений инбридинга были выявлены существенные различия (%) между рыбами, выращенными в оптимальных кормовых условиях и при недостатке корма
Как видно из этих данных, различия между параметрами плодовитости у рыб І, в условиях недостатка корма оказались более значительными, чем у самок 1,. Таким образом, на фоне стрессовых воздействий и с увеличением степени инбридинга наблюдалось типичное возрастание депрессии по репродуктивным признакам. — Кроме того, как было показано выше (см. табл. 5.5), существенные различия между инбредными и племенными потомствами были обнаружены и при изучении других признаков, связанных с репродукцией, – диаметра овулировавших икринок и его изменчивости. При исследовании инбредных самок І, достоверные различия между ними и племенными семьями были выявлены по размеру икринок, который оказался у инбредных рыб меньше (р<0,01), чем у племенных, и при избытке (1,84+0,006), и при недостатке корма (1,8110,007). Снижение размера икринок у инбредных рыб при недостатке корма свидетельствует о том, что ооциты у этих самок в условиях дефицита корма перед нерестом имели к моменту овуляции меньший дефинитивный размер, чем у рыб, не испытывавших недостатка в пище. В семьях сибсов и линиях I, зависимости величины диаметра икринок от условий выращивания не выявлено.
Что касается индивидуальной изменчивости икринок по диаметру, то у инбредных самок І, она также зависела от условий выращивания: на «оптимальной» среде - V % – 3,40, на «минимальной» — 2,77% (р<0,01). Снижение вариабельности икринок по диаметру при недостатке корма было обнаружено в семьях сибсов и было связано, по-видимому, с процессами созревания яйцеклеток при неблагоприятных условиях содержания самок (Андрияшева, Черняева, 1980). Исследование еще одного важного показателя качества икры — изменчивости вариабельности диаметра икринок у разных самок (V„%) — показало, что при недостатке корма наблюдается почти двукратное повышение величины этого признака: на «оптимальной» среде – 14,6%, на «минимальной» — 28,1% (Черняева, Мельникова, 1991).
Вместе с тем сопоставление коэффициента изменчивости икринок по диаметру у самок разных поколений инбридинга показало, что индивидуальная изменчивость икринок возрастала в ряду поколений инбридинга – от 2,29% у сибсов, 2,79 в 1,3,22 у самок I, и до 3,4% в 1, (р<0,05), что могло служить дополнительным свидетельством ухудшения качества икры при увеличении степени инбридинга.
Сходные результаты были получены и при сравнительном исследовании трехлетних самцов из линий 3 поколений инбридинга (Ефанов, Черняева, 1994). В результате изучения особенностей инбредных самцов было установлено, что размерно-весовые и репродуктивные показатели этих рыб отличаются большим разнообразием (табл. 5.6).
При исследовании трехлетних самцов 1, так же не отличавшихся по весу от контрольных рыб, как и самки, были обнаружены две линии, имевшие повышенную изменчивость рыб по весу (V=22, 1-27,8%), при том, что вариация этого признака у племенных особей не превышала 13%. В этих линиях обнаружено значительное количество рыб (до 10%) с искривленным позвоночником (Ефанов, Черняева, 1994).
Таблица 5.6 Размерно-весовые и репродуктивные признаки трехлетних самцов І, при разной обеспеченности рыб кормом
Изучение репродуктивных качеств инбредных самцов показало, что уже в 1-м поколений инбридинга количество и качество спермы значительно ухудшились: в некоторых случаях они давали эякуляты, характерные для конца нерестового сезона, — большой объем спермы с резко сниженной концентрацией спермиев (Андрияшева, Черняева, 1985). Среди четырехлетних самцов І количество рыб, не участвовавших в нересте, оказалось в 3 раза выше, чем у контрольных особей. У рыб 1, коэффициенты вариации по объему эякулята в восьми линиях колебались в пределах 28-65%, при V=25% у контрольных особей. По среднему объему эякулята четырехлетки 1, и контрольные рыбы не различались, но по качественным характеристикам спермы — концентрации спермиев в эякулятах и степени активности – они значительно уступали контрольным особям (р<0,001).
Bo2-м поколении репродуктивные качества самцов Изменились только на контрастных средах – объем эякулята при недостатке корма снизился на 34%, но качественные характеристики спермы у инбредных трехлеток не ухудшились.
При исследовании инбредных обнаружены аналогичные различия по двум репродуктивным показателям (р<0,01) — объему эякулята (на «—» среде) и по концентрации спермиев при разных вариантах обеспеченности рыб кормом. Кроме того, в этом поколении наблюдалось значительное увеличение (почти в 2 раза) количества самцов, не отдавших сперму при ухудшении обеспеченности кормом, как у племенных рыб, так и у инбредных; при этом у последних количество несозревших самцов оказалось на 25% больше, чем в контроле (см. табл. 5.6).
Сравнительный анализ изменчивости инбредных и племенных самок в условиях их совместного выращивания показал, что в среднем изменчивость инбредных самок по двум параметрам плодовитости была существенно выше (р<0,01) как при избытке, так и при недостатке корма (табл. 5.7). Изменчивость диаметра икры у инбредных самок, выращенных при недостатке корма (2,5%), была значительно ниже, чем у племенных самок (3,0%). Изменчивость самок по вариабельности икринок по размеру (V, %) оказалась повышенной только на фоне недостатка корма (17,8 и 24,1%). Сопоставление коэффициентов вариации у рыб из разных линий на одной из сред выявило отличия по всем исследованным репродуктивным признакам, большинство из которых были достоверными (р<0,05).
Сходные результаты были получены при аналогичном исследовании показателей изменчивости репродуктивных признаков у инбредных самцов (см. табл. 5.6). По всем изученным признакам, кроме концентрации спермиев, вариабельность инбредных рыб оказалась выше, чем племенных, и при избытке, и при недостатке корма.
Таблица 5.7 Изменчивость (V,%) репродуктивных признаков у самок пеляди из инбредных линий из сибсовых семей
Таким образом, сравнительное исследование различных рыбоводнобиологических признаков у производителей пеляди из линий трех последовательных поколений тесного инбридинга позволило убедиться в том, что он может достаточно быстро привести к снижению репродуктивных качеств как самок, так и самцов, несмотря на то, что при создании инбредных линий пеляди (в отличие от других объектов аквакультуры) использовались рыбы из природной популяции. Важно подчеркнуть при этом, что инбредная депрессия у пеляди (как и у других видов) проявилась по признакам, определяющим приспособленность, и выразилась в снижении гомеостаза развития и увеличении изменчивости за счет паратипической компоненты по показателям, связанным с репродуктивной функцией.