Созревание ооцитов при гормональных воздействиях

После анализа гаметогенеза и половых циклов пеляди следует остано виться на особенностях гормональной регуляции завершающих этапов Оогенеза, в частности на вопросах омедиаторах созревания и овуляции. Важную роль в решении этих проблем играет метод работы in vitro, позволяющий проводить эксперименты в одинаковых стандартных усло виях и испытывать действие большого набора гормональных препаратов на большом объеме генетически однородного материала (икра от одной самки).

На основании этого метода было показано, что наиболее эффектив ным стероидом, вызывающим созревание ооцитов радужной форели Sal mo gаirdneri, оказался 17 а-гидрокси-20 B-дигидропрогестерон [Fostier et al., 1973). Наши данные, полученные на этой рыбе, также говорят в пользу того, что медиатором созревания у форели является производное прогестерона Гуреева-Преображенская, 1978; Гуреева-Преображен ская, Сакун, 1974]. В настоящее время существует тенденция выделить сиговых рыб в самостоятельное семейство [Решетников, 1975, 1980), и в связи с этим представляло интерес выяснить, насколько сходен про цесс созревания у этих групІІ рыб.
Объектом исследования были б віrервые созревающих самок пеляди из ЦЭС «Ропша». Инкубацию проводили по нашей методике [Сакун, Гуреева-Преображенская, 1975] с небольшой модификацией (при более Низкой температуре — 1,0— 1,1°).
в качестве гормональных препаратов использовали следующие сте роиды: 17 а-оксипрегненолон, 17-оксипрогестерон, прогестерон, 11-дезоксикортизол, гидрокортизон, кортизон-ацетат в концентрацин 5мкг/мл Инкубационной среды. Гидрокортизон и кортизон-ацетат применяли в ВИде водной суспензии, остальные гормоны растворяли в 96°-ном этило вом спирте.
Длительность инкубации составляла 44-48 ч. Появление rервых при: знаков созревания отмечали визуально и прижизненно по изменению окраски ооцитов, обусловленной слиянием желтка. Кусочки гонад фик сировали в жидкости Серра и после просветления подсчитывали процент созревших ооцитов в каждой II робе под стереоскопическим микроскопом, Единичные дегенерировавшие ОбЦИТы в расчет не принимали. Для уточ нения состояния ооцитов часть материала обрабатывали гистологически по общепринятой методике с использованием целлоидин-касторового масла. Парафиновые сре?ы толщиной 5мл окрашивали железным гема ТоксHЛИНОМ ІІО Тейденгайну.
Эксперименты проводили в нерестовый сезон. Для работы выбирали наименее зрелых самок, икра которых еще не обладала инерцией созре вания, т. е. вне организма такие ооциты созревали лишь при добавлении соответствующих гормонов, Исходное состояние ооцитов характеризо валось слабым смещением ядра канимальному полюсу и началом концентрации ядрышек,

1 Под влиянием стероидов происходило смещение ядра под самук обо лочку в область Микропиле, укрупнение желточных глобул, а затем и Их слияние в гомогенную массу. Ядерная оболочка растворялась, ядрышI ки образовывали выросты, как это описано у чудского снга [Сакун, 1961 ), и часто были собраны в виде «букета». Затем начиналось фор мирование веретена первого деления созревания, которое в отдельных боцитах протекало сравнительно быстро. В результате этого в одной пробе можно было наблюдать картины от начала формирования вере тена до окончания этого процесса. Таким образом, гистологическая обра ботка убеждает в нормальном протекании процесса созревания ооцитов пеляди in vitro и позволяет более уверенно трактовать результаты экс периментов.
Как видно из табл. 31, наиболее активными стимуляторами созрева ния оказались стероиды из группы гестагенов (т. е. прогестерон, 17 а-ок сипрогестерон и 17 3-оксипрегненолон). В опыте на самках 1 и 2, по ставленном 10.XI 1977 г., наибольший процент созревания ооцитов был Получені в вариантах с 17 х-оксипрогестероном и 17 z-оксипрегненолоном. Стимулирующее влияние прогестерона в том опыте было выражено сла бее. Реакция ооцитов на действие кортикостероидов была неоднотиной. Если кортизон-ацетат оказался неэффективным в индукции созревания, а 1-дезоксикортизол вызывал созревание лишь у небольшой части Обци - тов, стимулирующее действие гидрокортизона проявилось довольно силь но и даже превысило влияние прогестерона.
В опыте на самках 3, 4, 5 и 6, поставленном две недели спустя, под твердились основные наблюдения, сделанные в предыдущем опыте, при чем исходно разная степень зрелости самок позволила обнаружить раз личную реакцию ооцитов на стероиды. У менее зрелой самки (3) особенно 

Таблица 31. Влияние различных стимуляторов на созревание ооцитов пеляди

четко выявилось действие 17 с-оксипрегненолона, ау более зрелой самки (4) наиболее активными были все три представителя гестагенов, существенно отличаясь по активности от кортикостероидов. У наиболее зрелых самок (5 и 6) реакция на стероиды протекала настолько быстро, что уловить разницу в эффективности разных гормонов не удалось. Ооциты этих самок одинаково хорошо созревали под влиянием как ге стагенов, так и кортикостероидов. Это объясняется, вероятно, высокой степенью зрелости овариальных фолликулов, а также возможностью взаимопревращения стероидов в стероидсекретирующих элементах. В пользу этого предположения говорит и тот факт, что кортизон-ацетат, не оказавший стимулирующего влияния у пяти самок, все же вызвал созревание у небольшого числа ооцитов самой зрелой самки (6).
Несмотря на высокую стимулирующую активность гестагенов, еще нет достаточных оснований считать их истинными медиаторами созрева НИЯ ооцитов пеляди. Как известно, прегненолон и прогестерон, а также их производные являются предшественниками в биосинтезе многих сте роидных гормонов, в частности кортикостероидов [Юдаев и др., 1976]. Можно предположить, что и в данном случае в стероидсекретирующих элементах овариального фолликула из гестагенов (или при их участии) синтезируется синтетический медиатор созревания, обладающий най большей активностью, что и обусловливает наивысший процент созрева ния при добавлении этих гормонов. О природе этого специфического ме диатора в настоящее время говорить нельзя. Однако результаты действия 11-дезоксикортизола и особенно гидрокортизона позволяют высказать соображение по этому вопросу. Принципиальная возможность созрева ния ооцитов пеляди под влиянием этих гормонов, а также в некоторых случаях высокая стимулирующая активность гидрокортизона (самки 1 и 2) позволяют предположить, что медиатором созревания у этого вида является какой-то кортикостероид, возможно близкий к гидрокортизону. Слабая реакция ооцитов зрелой самки (6) на кортизон-ацетат может свидетельствовать в пользу того, что в зрелых фолликулах этот неэф фективный в индукции созревания кортикостероид может превращаться в более активный гормон.
При сравнении результатов, полученных на пеляди и радужной форе Ти, обращает на себя внимание не только возможное различие в медиа торах созревания, но и отсутствие стимулирующего влияния ряда корти - костероидов (в частности, гидрокортизона) на созревание ооцитов форе ли [Jalabert et al., 1973; Гуреева-Преображенская, 1978]. Эти данные Позволяют присоединиться к мнению (о необходимости выделения лосо севых и сиговых рыб в разные семейства [Решетников, 1975, 1980].
Дальнейшее исследование вопросов, связанных с механизмами гор мональной регуляции завершающих этатов Оогенеза, в частности выяс нение медиаторов созревания и овуляции, представляет интерес не толь ко в связи с изучением общих закономерностей этих процессов, но и для совершенствования методов гормонального управления нерестом рыб.

 Е. В. Гуреева-Преображенская